Скачать статью в PDF формате
English version
УДК 619:615.015.4
ВЛИЯНИЕ КОМБИНИРОВАННОГО ПРОТИВОПАРАЗИТАРНОГО ПРЕПАРАТА АВЕРСЕКТ ПЛЮС НА ОРГАНИЗМ СОБАК
К.Г. КУРОЧКИНА
доктор ветеринарных наук
З.Г. МУСАЕВ
аспирант
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии им. К.И. Скрябина, 117218, Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28,
e-mail: vigis@ncport.ru
Введение аверсекта плюс незараженным собакам не оказывает негативного влияния на показатели неспецифической резистентности организма и белкового спектра сыворотки крови, а также на основные гематологические показатели. У инвазированных животных после дегельминтизации к 30 суткам происходит оптимизация уровней сывороточных факторов неспецифической резистентности – содержание белка, лизоцима, уровня циркулирующих иммунных комплексов и показателей крови.
Ключевые слова: неспецифичекая резистентность, общий белок, лизоцимная активность, α-, β-, γ-глобулины, циркулирующие иммунные комплексы, форменные элементы крови.
Основным звеном в системе мер борьбы с гельминтозами животных является этиотропная терапия. Для борьбы с гельминтами постоянно предлагаются новые или усовершенствуются уже имеющиеся антигельминтные препараты [1]. Поэтому в литературе представлен достаточно обширный материал по исследованиям о влиянии различных антигельминтиков на организм животных. Это влияние может проявляться как в связи с фармакологическим влиянием препарата на патологический процесс, так и побочным влиянием на различные функции клеток, тканей и органов. По существующим правилам каждое новое лекарственное средство должно быть исследовано на предмет установления его влияния на организм животного [7].
Комбинированный антигельминтный препарат, в состав которого входит аверсектин С1 и празиквантел (аверсект плюс), предназначен для дегельминтизации собак и кошек при нематодозах и цестодозах.
Цель наших исследований – изучение влияния нового комбинированного противопаразитарного препарата аверсект плюс на организм инвазированных и здоровых собак. Исследования включают изучение его влияния на гематологические и некоторые биохимические показатели, характеризующие уровень неспецифической резистентности организма (лизоцимная активность сыворотки крови, содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), протеинограмма (общий белок, альбумины, глобулины (α-, β-, γ-), соотношение альбумины/глобулины (А/Г).
Материалы и методы
В состав комбинированного антигельминтного препарата аверсект плюс (аверсектин С1 + празиквантел) входит 0,5 % аверсекта-3 и 5% празиквантела (ДВ – 0,5 мг/кг по аверсекту-3 и мг/кг по празиквантелу). Препарат вводили подкожно в терапевтической дозе 1 мл/10 кг.
Исследования проводили в лаборатории ВИГИС и в Республиканском диагностическом центре г. Махачкалы.
Для изучения влияния препарата на организм собак сформировали две группы животных по 6 голов в каждой в возрасте от двух до четырех лет на базекинологического питомника ЛИУ-4 г. Махачкалы. В первую группу входили собаки, спонтанно инвазированные нематодами и цестодами при обнаружении 184,7 и 271,1 экз. яиц в 1 г фекалий соответственно, а вторая группа состояла из условно здоровых собак. Эту группу собак сформировали после трехкратного исследования их фекалий. Поскольку яиц гельминтов обнаружено в фекалиях не было, то животных считали свободными от гельминтов, т. е. условно здоровыми.
Для исследований кровь брали от опытных животных до введения препарата и на 7, 15 и 30-е сутки после дегельминтизации.
Исследования крови проводили по общепринятым в гематологии методам: определяли количество форменных элементов крови и ее состав: эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, выводили лейкограмму, определяли содержание гемоглобина.
Биохимические исследования крови проводили с помощью полуавтоматического биохимического анализатора «TARGA-2000». При этом в крови определяли показатели общего белка и его фракций (α-, β-, γ-глобулины).
Лизоцимную активность сыворотки крови определяли фотоэлектроколометрическим методом [6].
Количественный анализ циркулирующих иммунных комплексов проводили по методу, основанному на селективной преципитации ЦИК 3,75%-ным полиэтиленгликолем с последующим измерением оптической плотности преципитата на «Spekol» при длине волны 450 нм [2]. Результаты выражали в условных единицах оптической плотности.
Эффективность препарата учитывали по результатам исследований проб фекалий количественным методом флотации с насыщенным раствором поваренной соли [4] с использованием счетной камеры ВИГИС [5] для учета количества яиц в 1 г фекалий до и через 10 сут после дегельминтизации.
Статистическую обработку полученных данных проводили по Стъюденту–Фишеру (с использованием t-критерия) с помощью компьютерной про- граммы «STUDENT-2000.
Результаты и обсуждение
До введения препарата количество эритроцитов у животных первой группы находилось на уровне 7,56±0,51 х 1012/л, во второй – 5,14+0,45 х 1012/л. Количество лейкоцитов у животных первой группы составляло 7,56+0,85 х 109/л, во второй группе было выше в 1,47 раза – 13,28+2,70 х 109/л.
Уровень гемоглобина у животных первой группы был в пределах физиологической нормы – 122,72+11,54, во второй – ниже в 1,23 раза – 99,24+7,63 г/л.
Содержание тромбоцитов у собак первой и второй группы колебалось в течение всего срока наблюдений в пределах физиологической нормы для данного вида животных и составляло 249,3–406,6 х 109/л.
Результаты исследований крови собак до и в динамике после дегельминтизации приведены в таблице 1.
При анализе лейкограммы выявили, что процентное соотношение клеток крови у зараженных и незараженных собак достоверно не отличались и колебания не выходили за пределы нормальных физиологических параметров. У животных зараженной группы выявили эозинофилию, достигавшую 8,56 %, тогда как у животных в первой группе этот показатель был на уровне 3,84– 5,17 % в течение всего периода наблюдений (30 сут). Снижение уровня эозинофилов в крови собак произошло после дегельминтизации к концу исследований, что связано с освобождением животных от гельминтов.
1. Кинетика гематологических показателей у собак при введении аверсекта плюс (n = 6)
|
Группа |
Результаты исследований, сутки после дегельминтизации |
||||
|
0 |
7 |
15 |
30 |
||
|
Эритроциты, х 1012/л |
|||||
|
1 |
7,56+0,51 |
6,70+0,34 |
7,11+0,67 |
6,98+0,54 |
|
|
2 |
5,14+0,45 |
5,59+0,32 |
5,62+0,83 |
6,24+0,88 |
|
|
Лейкоциты, х 109/л |
|||||
|
1 |
7,56+0,85 |
7,83+0,48 |
7,82+0,59 |
7,02+0,37 |
|
|
2 |
13,28+2,70 |
12,5+1,68 |
10,87+1,19 |
8,27+0,49 |
|
|
Гемоглобин, г/л |
|||||
|
1 |
122,7+11,54 |
129,52+7,19 |
122,34+9,27 |
120,53+16,35 |
|
|
2 |
99,24+ 7,63 |
105,28+9,24 |
114,67+12,17 |
116,97+10,42 |
|
|
Тромбоциты, х 109/л |
|||||
|
1 |
320,7+ 23,4 |
387,3+28,3 |
406,6+34,1 |
368,5+24,9 |
|
|
2 |
349,3+22,7 |
249,6+28,1 |
381,4+22,6 |
391,8+31,7 |
|
Результаты проведенных исследований показали, что количество эритроцитов, лейкоцитов и уровень гемоглобина у животных второй группы в течение периода испытаний находились в пределах колебаний физиологической нормы. У зараженных животных гематологические показатели были на нижней границе нормы (гемоглобин, эритроциты), а количество лейкоцитов и содержание эозинофилов отличались от уровня животных контрольной группы в 1,47 и 2,2–1,6 раза, что является следствием влияния паразитарной инвазии.
Судя по данным гематологических исследований препарат, применяемый в терапевтической дозе, не вызывает статистически достоверных изменений гематологических показателей у собак. Подобные результаты были получены при испытании аверсекта-3 на собаках [3].
При применении антигельминтного препарата, кроме его терапевтической эффективности, важно знать о его влиянии на параметры неспецифической или естественной защиты организма животного. Биохимический анализ сыворотки крови, отражающий функциональное состояние органов и систем организма, необходимо учитывать наряду с оценкой эффективности.
При анализе показателей белков крови зараженных собак (табл. 2) до лечения установлено снижение концентрации общего белка в сыворотке на 15,1
% и уровня альбуминов и γ-глобулинов и небольшое процентное нарастание α- и β-глобулиновой фракций. Соотношение альбуминов и глобулинов было 0,78, у незараженных собак – 1,14 (табл. 3).
К 30-м суткам опыта у леченых собак отмечали положительную достоверную динамику следующих показателей. Количество общего белка и уровень γ-глобулинов достигали значений, полученных у незараженных собак. Снизились показатели α- и β-глобулиновой фракции белков.
В протеинограмме отмечено повышение содержания альбуминов. К 30-м суткам этот показатель составил 30,8 %, что приближалось к средним значениям у незараженных собак. Увеличилось содержание γ-глобулинов с 9,3 до 15,7 %, соотношение А/Г возросло до 0,91.
Таким образом, дегельминтизация способствовала восстановлению до нормальных значений у зараженных собак таких биохимических показателей, как общий белок, альбумины. Освобождение животных от инвазии стимулировало восстановление γ-глобулиновой фракции белка до нормальных значений.
2. Биохимические показатели сыворотки крови собак первой группы после дегельминтизации аверсектом плюс (n = 6)
|
Показатель |
До лечения |
Значение показателя, сутки после дегельминтизации |
||
|
|
|
7 |
15 |
30 |
|
Общий белок, г/л Альбумины, % α-глобулины, % β-глобулины, % γ-глобулины, % А/Г |
51,3±2,18 25,9±1,58 13,6±0,88 10,2±0,95 9,3±0,76 0,78 |
56,3±2,68 27,9±2,51 12,3±0,74 11,1 ±0,44 9,7±2,12 0,84 |
61,1±1,87 28,3±2,28 11,2±0,33 11,9±0,91 12,8±0,98 0,76 |
64,1±2,14 30,8±3,19 10,6±0,88 10,3±0,53 15,7±0,67 0,91 |
3. Биохимические показатели сыворотки крови собак второй группы после дачи аверсекта плюс (n = 6)
|
Показатель |
До лечения |
Значение показателя, сутки после дачи препарата |
||
|
|
|
7 |
15 |
30 |
|
Общий белок, г/л Альбумины, % α-глобулины, % β-глобулины, % γ-глобулины, % А/Г |
66,4±1,79 38,9±1,08 10,1±1,89 8,7±0,35 15,3±1,58 1,14 |
68,9±3,59 34,4±1,73 11,4±1,03 9,5±0,66 16,2±1,05 0,92 |
64,1±2,25 36,3±1,64 11,2±0,92 8,2±0,55 15,5±2,13 1,04 |
68,2±2,59 35,8±0,83 11,4±1,70 10,1±0,57 16,1±1,59 0,95 |
Восстановление показателей естественной резистентности после освобождения животных от инвазии также имеет большое значение для оценки эффективности антигельминтного препарата. Дача аверсекта плюс не оказала отрицательного влияния на эти показатели у незараженных собак при введении им испытуемого препарата (табл. 4).
4. Показатели естественной резистентности организма незараженных собак после дачи аверсекта плюс (n = 6)
|
Показатель |
Значение показателя, сутки после дачи препарата |
|||
|
|
0 |
7 |
15 |
30 |
|
ЦИК, ед. опт. пл. |
74,60±3,26 |
73,53±3,19 |
71,83±4,01 |
72,02±3,28 |
|
Сывороточный лизо- цим, % |
23,90±3,17 |
24,83±2,56 |
24,53±3,01 |
24,63±2,45 |
Изменения в показателях естественной резистентности организма после дачи аверсекта плюс у зараженных собак отражены в таблице 5.
5. Показатели естественной резистентности организма зараженных собак после дегельминтизации аверсектом плюс (n = 6)
|
Показатель |
Значение показателя, сутки после дегельминтизации |
|||
|
|
0 |
7 |
15 |
30 |
|
ЦИК, ед. опт. пл. |
116,43±7,45 |
123,7±5,24 |
87,93±4,03 |
79,53±3,78 |
|
Сывороточный лизо- цим, % |
18,10±2,33 |
16,63±1,94 |
20,13±2,69 |
22,07±2,92 |
Отмечено, что у инвазированных собак происходит формирование циркулирующих иммунных комплексов. Комплексы антиген–антитело формируются при нейтрализации экзо- и эндогенных антигенов. Формирование ЦИК является обязательным компонентом нормального иммунного ответа. Поступающий антиген связывается с ними. Поэтому их уровень является интегральным показателем антигенной нагрузки на иммунную систему [8], и, по-видимому, увеличение их концентрации на седьмые сутки после дегельминтизации до 123,7 ед. опт. ед., связано с дополнительным поступлением в кровь антигенов гельминтов после их гибели в результате лечения, у собак из второй группы этот показатель был значительно ниже. Через месяц после дегельминтизации уровень ЦИК у собак первой группы снизился и составил 79,53 ед. опт. ед., что приближалось к значениям незараженных собак – 72,02 (Р ≥ 0,05).
Активность сывороточного лизоцима была снижена у зараженных собак и составляла на 7-е сутки после дегельминтизации 16,1 %, у незараженных животных – 23,17 %, что в 1,44 раза ниже (Р ≤ 0,05). Через две недели данный показатель начинал увеличиваться и к 30-м суткам составил 22,07 %, и был незначительно ниже, чем у незараженных собак – 24,63 % (Р ≥ 0,05).
Дегельминтизация аверсектом плюс способствовала нормализации факторов естественного иммунитета, в частности, уровней сывороточных факторов неспецифической резистентности: лизоцима и ЦИК. Нормализовались основные гематологические показатели. Эффективность препарата составила 100 %.
Таким образом, после освобождения собак от инвазии регистрировали положительную динамику показателей естественной резистентности: количество циркулирующих иммунных комплексов и активность лизоцима приближались к нормативным значениям. У незараженных собак введение антигельминтика не вызывало отрицательного воздействия на естественную резистентность, гематологические и биохимические показатели.
Литература
1. Архипов И.А. Антигельминтики: фармакология и применение. – М., 2009. – 205 с.
2. Гриневич Ю.А., Алферов А.И. Определение циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови // Лаб. дело. – 1981. – № 8. – С. 93–95.
3. Колесникова Н.А. Аспекты безопасного применения препаратов на основе авермектинов у собак и кошек: Автореф. дис. … канд. биол. наук. – М., 2006. – 19 с.
4. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. – М.: Колос, 1984. – С. 45–48.
5. Мигачева Л.Д., Котельников Г.А. Методические указания по использованию устройства для подсчета яиц гельминтов при диагностике нематодозов животных // Бюл. Всес. ин-та гельминтол. – 1987. – Вып. 48. – С. 81–83.
6. Методические рекомендации по определению неспецифической резистентности организма при гельминтозах. – М., 1984. – С. 7–8.
7. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М., 2005. – С. 54–68.
8. Сухоруков Ю.В., Сведенцов Е.П., Докшина И.А. Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) и параметры естественного иммунитета при онкологическом выздоровлении больных острым лейкозом //Вятский мед. вест- ник. – 2007. – № 4. – С. 69 – 70.
© 2016 The Author(s). Published by All-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants named after K.I. Skryabin.
This is an open access article under the Agreement of 02.07.2014 (Russian Science Citation Index (RSCI) and the Agreement of 12.06.2014 (CABI.org / Human Sciences section).