Подострая токсичность инъекционного препарата Риказол

Фармакология, токсикология
УДК 619:615.015.4
Скачать статью в PDF формате
English version


ПОДОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ИНЪЕКЦИОННОГО ПРЕПАРАТА РИКАЗОЛ

Е.В. АБРАМОВА
аспирант
И.А. АРХИПОВ
Научный руководитель – доктор ветеринарных наук
А.В. БАЛЫШЕВ
кандидат биологических наук

Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии
им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28,
e-mail: vigis@ncport.ru
Е.В. ГЛУХАРЕВА
ООО МНИЦ «ОЗОС», г. Москва, e-mail:cozos@mail.ru
С.В. НОВИКОВА
кандидат биологических наук
ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов, e-mail: sr-center@nita-farm.ru

Изучена подострая токсичность инъекционного препарата риказол, содержащего в 1 мл 100 мг рикобендазола. Препарат в дозах 125 и 50 мг/кг при ежедневном введении в течение 7 сут не вызывал отклонений в поведении, потреблении корма и воды,  гематологических и биохимических показателях, массовых коэффициентах органов, функциональном состоянии крыс. Введение риказола в дозе 250 мг/кг снижало привесы и массу тела,  вызывало угнетение животных и падеж, изменения основных гематологических и биохимических показателей, в том числе эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, билирубина, мочевины и активности аланинаминотрансферазы. Доза препарата 250 мг/кг является токсичной.

Ключевые слова: риказол, рикобендазол, токсические свойства, крысы, биохимия, гематология.

Гельминтозы продуктивных животных причиняют большой экономический ущерб животноводческим хозяйствам. Наиболее эффективным методом борьбы с ними является применение антигельминтных препаратов. Компанией «Нита-Фарм» разработан новый инъекционный противопаразитарный препарат на основе рикобендазола - риказол.

Целью данной работы было изучение подострой токсичности риказола на лабораторных животных.

Материалы и методы

Подострую токсичность риказола изучали на 40 крысах-самцах исходной массой 190-200 г согласно Руководству и методам по оценке препаратов [1-4]. Животных разделили на 4 равноценные группы по 10 крыс в каждой: 3 опытные и 1 контрольную. Выбранные дозы препарата представляли дозировки, кратные значению ЛД50, установленной в остром опыте – 2500 мг/кг по препарату. Риказол вводили ежедневно в течение 7 сут  внутримышечно в дозах 250, 125, 50 мг/кг (1/10, 1/20, 1/50 от ЛД50) по препарату. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор в объеме 0,4 мл/200 г.

В течение всего периода применения  препарата наблюдали за общим состоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела. В конце опыта через сутки после последнего введения риказола животных убивали декапитацией и отбирали пробы крови (с антикоагулянтом и без) для определения гематологических и биохимических показателей.

Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе, лейкограмму – общепринятым методом, биохимические показатели крови - на анализаторе Biosystems A-15. Устанавливали массу основных органов и рассчитывали массовые коэффициенты. Функциональное состояние ЦНС оценивали по визуальным наблюдениям за двигательной активностью, реакцией на внешние раздражители.

Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью сравнения средних значений по двустороннему t-критерию Стьюдента. Различия определяли при уровне значимости 0,05. Статистический анализ выполняли с помощью программы «Student-200».

Результаты и обсуждение

Как показали  результаты исследований, введение риказола в дозе 250 мг/кг (1/10 от ЛД50) отразилось статистически значимым образом на привесах. Изменения массы тела животных в указанной дозе фиксировали на 5-е сутки  опыта. На 6-е сутки животные по сравнению с контролем хуже поедали корм, одна крыса пала, у одной регистрировали угнетение и тремор. Павшая крыса подверглась вскрытию.

При патологоанатомическом вскрытии были выявлены кровоизлияния  на сердце, в легких. Опытные  крысы потребляли корм и воду на протяжении всего опыта менее интенсивно, чем контрольные животные. Динамика прироста массы тела у крыс приведена в таблице 1.

1. Динамика прироста массы тела у крыс при введении риказола в трех дозах в течение 7 сут (n = 10)

Неделя

Дозы, мг/кг (по препарату)

Контроль

250

125

50

0

218,30±2,53

220,50±4,05

220,50±4,45

223,70±3,08

1

210,10±2,35*

231,23±2,12

235,14±2,05

238,48±2,22

% к исходной массе тела

84,10±2,13*

103,57±3,75

104,36±4,06

106,25±3,79

Примечание. ٭- P ≤ 0,05.

Результаты исследований массовых коэффициентов органов крыс приведены в таблице  2. Как следует из приведенных в таблице 2 данных, риказол привел к изменению средней массы органов крыс, которым вводили дозу 250 и 125 мг/кг. Так, средняя масса сердца подопытных крыс, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг, составила 0,82±0,04 г против данных контроля 0,95±0,03 г. Средняя масса легких крыс после введения риказола в дозах 250 и 125 мг/кг составила соответственно 0,80±0,10 и  1,63±0,05 г против данных контроля 2,01±0,11 г. Средняя масса  селезенки после введения риказола в дозах 50 и 125 мг/кг составила 0,55±0,05 г и 0,69±0,03 г против 1,00±0,06 г в контроле. Остальные массовые коэффициенты не претерпели достоверных изменений.

Отмечены различия в относительной массе органов крыс, которым вводили риказол в дозах 250 и 125 мг/кг. Так, относительная масса печени крыс, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг, достигала 3,91±0,15 % против 3,34±0,16 % в контроле, относительная масса легких - 0,38±0,05 и 0,70±0,03 % против 0,84±0,05 % в контроле после введения риказола в дозах 250 и 125 мг/кг, относительная масса селезенки - 0,26±0,04 и 0,30±0,05 % против данных контроля 0,41±0,05 % после дачи препарата в дозах 250 и 125 мг/кг.

2. Влияние риказола на массовые коэффициенты органов белых крыс (n = 10)

Показатель

Дозы, мг/кг (по препарату)

Контроль

250

125

50

Ср. масса тела, г

210,10±2,35*

231,23±2,12

235,14±2,05

238,48±2,22

Ср. масса сердца, г

0,82±0,04*

0,93±0,03

0,90±0,03

0,95±0,03

Отн. масса сердца, %

0,39±0,05

0,40±0,02

0,38±0,06

0,40±0,03

Ср. масса печени, г

8,22±0,26

7,91±0,22

7,25±0,30

7,97±0,42

Отн. масса печени, %

3,91±0,15*

3,42±0,24

3,08±0,19

3,34±0,16

Ср. масса легких, г

0,80±0,10*

1,63±0,05*

1,98±0,07

2,01±0,11

Отн. масса легких, %

0,38±0,05*

0,70±0,03*

0,84±0,06

0,84±0,05

Ср. масса селезенки, г

0,55±0,11*

0,69±0,13*

0,81±0,19

1,00±0,15

Отн. масса селезенки, %

0,26±0,04*

0,30±0,05*

0,34±0,07

0,41±0,05

Ср. масса почек, г

1,64±0,05

1,68±0,05

1,70±0,05

1,76±0,08

Отн. масса почек, %

0,78±0,05

0,72±0,07

0,72±0,06

0,73±0,06

Примечание. ٭- P ≤ 0,05.

Объективная оценка токсических свойств риказола также включала определение гематологических и биохимических показателей крыс. Состояние крови - важный компонент токсикологических исследований.

Результаты определения гематологических показателей белых крыс обобщены в таблице 3.

3. Влияние риказола на гематологические показатели крыс при внутримышечном введении в течение 7 сут (n = 10)

Показатель

Дозы, мг/кг (по препарату)

Контроль

250

125

50

 

Эритроциты, 1012

7,56±0,14

7,02±0,54

8,37±0,14

7,86±0,16

Гематокрит, %

37,18±2,66*

42,69±0,50

44,51±0,78

43,95±1,27

Гемоглобин, г/л

118,07±8,87*

136,80±1,97

143,87±1,94

141,40±3,96

Тромбоциты, 109

818,60±62,52

934,30±40,39

1134,00±25,64

1068,20±38,85

Лейкоциты, 109

2,58±0,75*

6,74±0,99*

8,36±0,55

10,86±0,84

СОЭ мм/ч

0,40±0,14

0,60±0,16

0,50±0,18

0,30±0,05

 

Лейкограмма

Палочкоядерные
нейтрофилы, %

0

0,70±0,23

0,87±0,29

0,90±0,34

Сегментоядерные нейтрофилы, %

3,40±0,98*

7,30±1,84*

17,00±3,30

29,30±4,72

Эозинофилы, %

0

0

0

0,40±0,22

Моноциты, %

8,50±0,70*

7,20±1,16

5,10±1,30

4,70±0,82

Лимфоциты, %

88,10±2,04*

84,80±8,54

77,03±3,56

64,70±3,66

Примечание. ٭- P ≤ 0,05.

Как следует из приведенных данных, при внутримышечном введении препарата животным в дозе 250 мг/кг массы животного 7 сут подряд отмечено уменьшение количества гематокрита, гемоглобина, лейкоцитов.

Также наблюдали изменения в лейкограмме: уменьшение содержания сегментоядерных нейтрофилов - 3,40±0,98 % против 29,30±4,72 % в контрольной группе. Кроме того, отмечали повышение содержания моноцитов и лимфоцитов - соответственно 8,50±0,70 и 88,10±2,04 % против 4,70±0,82 и 64,70±3,66 % в контролеп.

При введении препарата в дозе 125 мг/кг было установлено уменьшение содержания эритроцитов и лейкоцитов, число которых составило 7,02±0,54 × 1012/л и 6,74±0,99 × 109/л против данных контроля 7,86±0,16 × 1012/л и 10,86±0,84 × 109/л соответственно. В лейкограмме отмечали снижение уровня сегментоядерных нейтрофилов до 7,30±1,84 %. Доза  50 мг/кг массы животного не оказывала достоверного влияния на гематологические показатели крыс.

Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод о том, что препарат в дозах 250 и 125 мг/кг оказывает негативное влияние на костномозговое кроветворение. Установленный лимфоцитоз, вероятно, связан с развитием лейкопении. Число лимфоцитов не изменяется, однако из-за уменьшения числа нейтрофилов в процентном соотношении число лимфоцитов увеличивается. Наблюдаемый эффект называют относительным лимфоцитозом. Он возникает в результате истинной нейтропении.

В таблице 4 приведены результаты определения биохимических показателей сыворотки крови белых крыс после многократного введения риказола.

4. Влияние риказола на биохимические показатели крови


Показатель

Дозы, мг/кг

Контроль

250

125

50

Билирубин общий, мкмоль/л

9,38+1,70*

15,63+1,32*

21,49+1,86

22,52+2,61

Билирубин прямой, мкмоль/л

1,50+0,30*

3,94+0,59

4,25+0,58

3,64+0,47

АСТ, Ед/л

238,40+18,82

311,00+25,77

336,09+10,19

344,80+46,53

АЛТ, Ед/л

46,80+2,56*

49,20+3,67*

52,64+1,92

77,50+12,66

Мочевина, ммоль/л

5,95+0,76*

6,29+0,21*

9,63+4,00

7,25+0,10

Креатинин, мкмоль/л

64,60+9,92

52,60+0,89

55,45+3,48

59,80+2,72

Общий белок, г/л

60,60+4,13*

63,70+1,05*

73,45+1,68

69,50+1,45

ЩФ, Ед/л

69,80+9,82*

191,09+13,41*

221,50+53,73

235,80+10,53

α- амилаза, Ед/л

115,54+20,83*

225,20+37,09*

737,60+37,63

950,60+79,55

Глюкоза, ммоль/л

3,62+0,74*

2,51+0,18*

2,04+0,23

1,84+0,34

ЛДГ, Ед/л

1677,00+86,90*

1636,91+17,70*

1720,00+212,30*

1849,30+34,94


Примечание. ٭- P ≤ 0,05.

Как следует из приведенных данных, при введении препарата в дозах 250 и 125 мг/кг произошло статистически достоверное снижение уровня общего билирубина, активности аланинаминотрансферазы, уровня мочевины, общего белка, активности щелочной фосфатазы, α-амилазы и лактатдегидрогеназы. Также, в дозе 250 мг/кг регистрировали повышение уровня глюкозы в крови опытных животных.

Данные изменения указывают на то, что препарат в увеличенных дозах оказывает гепатотоксическое воздействие на организм животных. Увеличение содержания лактатдегидрогеназы может свидетельствовать о наличии мышечной дистрофии.

Суммируя полученные результаты исследования подострого опыта, можно сделать заключение, что доза риказола 250 мг/кг при введении крысам в течение 7 сут является токсичной, доза 125 мг/кг – пороговой, 50 мг/кг – недействующей.

Литература

1. Rukovodstvo po jeksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv. – M., 2000.

2. Belen'kij M.D. Jelementy kolichestvennoj ocenki farmakologicheskogo jeffekta. – L.: Gosmedizdat, 1963. – 152 s.

3. Piralishvili I.S. K metodike podscheta jeozinofilov v perifericheskoj krovi // Lab. delo. – 1962. – № 3. – S. 20–22.

4. Prikaz MZ SSSR № 755 ot 12.08.77 g. «Pravila provedenija rabot s ispol'zovaniem jeksperimental'nyh zhivotnyh».