Фармакология, токсикология
УДК 619:615.015.4
Скачать статью в PDF формате
English version
ПОДОСТРАЯ ТОКСИЧНОСТЬ ИНЪЕКЦИОННОГО ПРЕПАРАТА РИКАЗОЛ
Е.В. АБРАМОВА
аспирант
И.А. АРХИПОВ
Научный руководитель – доктор ветеринарных наук
А.В. БАЛЫШЕВ
кандидат биологических наук
Всероссийский научно-исследовательский институт гельминтологии
им. К.И. Скрябина, 117218, г. Москва, ул. Б. Черемушкинская, 28,
e-mail: vigis@ncport.ru
Е.В. ГЛУХАРЕВА
ООО МНИЦ «ОЗОС», г. Москва, e-mail:cozos@mail.ru
С.В. НОВИКОВА
кандидат биологических наук
ЗАО «Нита-Фарм», г. Саратов, e-mail: sr-center@nita-farm.ru
Изучена подострая токсичность инъекционного препарата риказол, содержащего в 1 мл 100 мг рикобендазола. Препарат в дозах 125 и 50 мг/кг при ежедневном введении в течение 7 сут не вызывал отклонений в поведении, потреблении корма и воды, гематологических и биохимических показателях, массовых коэффициентах органов, функциональном состоянии крыс. Введение риказола в дозе 250 мг/кг снижало привесы и массу тела, вызывало угнетение животных и падеж, изменения основных гематологических и биохимических показателей, в том числе эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, билирубина, мочевины и активности аланинаминотрансферазы. Доза препарата 250 мг/кг является токсичной.
Ключевые слова: риказол, рикобендазол, токсические свойства, крысы, биохимия, гематология.
Гельминтозы продуктивных животных причиняют большой экономический ущерб животноводческим хозяйствам. Наиболее эффективным методом борьбы с ними является применение антигельминтных препаратов. Компанией «Нита-Фарм» разработан новый инъекционный противопаразитарный препарат на основе рикобендазола - риказол.
Целью данной работы было изучение подострой токсичности риказола на лабораторных животных.
Материалы и методы
Подострую токсичность риказола изучали на 40 крысах-самцах исходной массой 190-200 г согласно Руководству и методам по оценке препаратов [1-4]. Животных разделили на 4 равноценные группы по 10 крыс в каждой: 3 опытные и 1 контрольную. Выбранные дозы препарата представляли дозировки, кратные значению ЛД50, установленной в остром опыте – 2500 мг/кг по препарату. Риказол вводили ежедневно в течение 7 сут внутримышечно в дозах 250, 125, 50 мг/кг (1/10, 1/20, 1/50 от ЛД50) по препарату. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор в объеме 0,4 мл/200 г.
В течение всего периода применения препарата наблюдали за общим состоянием и поведением животных, возможной гибелью, приемом корма и воды, видимыми физиологическими функциями. Ежедневно у крыс регистрировали массу тела. В конце опыта через сутки после последнего введения риказола животных убивали декапитацией и отбирали пробы крови (с антикоагулянтом и без) для определения гематологических и биохимических показателей.
Основные показатели периферической крови крыс определяли на гематологическом анализаторе, лейкограмму – общепринятым методом, биохимические показатели крови - на анализаторе Biosystems A-15. Устанавливали массу основных органов и рассчитывали массовые коэффициенты. Функциональное состояние ЦНС оценивали по визуальным наблюдениям за двигательной активностью, реакцией на внешние раздражители.
Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью сравнения средних значений по двустороннему t-критерию Стьюдента. Различия определяли при уровне значимости 0,05. Статистический анализ выполняли с помощью программы «Student-200».
Результаты и обсуждение
Как показали результаты исследований, введение риказола в дозе 250 мг/кг (1/10 от ЛД50) отразилось статистически значимым образом на привесах. Изменения массы тела животных в указанной дозе фиксировали на 5-е сутки опыта. На 6-е сутки животные по сравнению с контролем хуже поедали корм, одна крыса пала, у одной регистрировали угнетение и тремор. Павшая крыса подверглась вскрытию.
При патологоанатомическом вскрытии были выявлены кровоизлияния на сердце, в легких. Опытные крысы потребляли корм и воду на протяжении всего опыта менее интенсивно, чем контрольные животные. Динамика прироста массы тела у крыс приведена в таблице 1.
1. Динамика прироста массы тела у крыс при введении риказола в трех дозах в течение 7 сут (n = 10)
Неделя |
Дозы, мг/кг (по препарату) |
Контроль |
|||
250 |
125 |
50 |
|
||
0 |
218,30±2,53 |
220,50±4,05 |
220,50±4,45 |
223,70±3,08 |
|
1 |
210,10±2,35* |
231,23±2,12 |
235,14±2,05 |
238,48±2,22 |
|
% к исходной массе тела |
84,10±2,13* |
103,57±3,75 |
104,36±4,06 |
106,25±3,79 |
|
Примечание. ٭- P ≤ 0,05.
Результаты исследований массовых коэффициентов органов крыс приведены в таблице 2. Как следует из приведенных в таблице 2 данных, риказол привел к изменению средней массы органов крыс, которым вводили дозу 250 и 125 мг/кг. Так, средняя масса сердца подопытных крыс, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг, составила 0,82±0,04 г против данных контроля 0,95±0,03 г. Средняя масса легких крыс после введения риказола в дозах 250 и 125 мг/кг составила соответственно 0,80±0,10 и 1,63±0,05 г против данных контроля 2,01±0,11 г. Средняя масса селезенки после введения риказола в дозах 50 и 125 мг/кг составила 0,55±0,05 г и 0,69±0,03 г против 1,00±0,06 г в контроле. Остальные массовые коэффициенты не претерпели достоверных изменений.
Отмечены различия в относительной массе органов крыс, которым вводили риказол в дозах 250 и 125 мг/кг. Так, относительная масса печени крыс, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг, достигала 3,91±0,15 % против 3,34±0,16 % в контроле, относительная масса легких - 0,38±0,05 и 0,70±0,03 % против 0,84±0,05 % в контроле после введения риказола в дозах 250 и 125 мг/кг, относительная масса селезенки - 0,26±0,04 и 0,30±0,05 % против данных контроля 0,41±0,05 % после дачи препарата в дозах 250 и 125 мг/кг.
2. Влияние риказола на массовые коэффициенты органов белых крыс (n = 10)
Показатель |
Дозы, мг/кг (по препарату) |
Контроль |
||
250 |
125 |
50 |
||
Ср. масса тела, г |
210,10±2,35* |
231,23±2,12 |
235,14±2,05 |
238,48±2,22 |
Ср. масса сердца, г |
0,82±0,04* |
0,93±0,03 |
0,90±0,03 |
0,95±0,03 |
Отн. масса сердца, % |
0,39±0,05 |
0,40±0,02 |
0,38±0,06 |
0,40±0,03 |
Ср. масса печени, г |
8,22±0,26 |
7,91±0,22 |
7,25±0,30 |
7,97±0,42 |
Отн. масса печени, % |
3,91±0,15* |
3,42±0,24 |
3,08±0,19 |
3,34±0,16 |
Ср. масса легких, г |
0,80±0,10* |
1,63±0,05* |
1,98±0,07 |
2,01±0,11 |
Отн. масса легких, % |
0,38±0,05* |
0,70±0,03* |
0,84±0,06 |
0,84±0,05 |
Ср. масса селезенки, г |
0,55±0,11* |
0,69±0,13* |
0,81±0,19 |
1,00±0,15 |
Отн. масса селезенки, % |
0,26±0,04* |
0,30±0,05* |
0,34±0,07 |
0,41±0,05 |
Ср. масса почек, г |
1,64±0,05 |
1,68±0,05 |
1,70±0,05 |
1,76±0,08 |
Отн. масса почек, % |
0,78±0,05 |
0,72±0,07 |
0,72±0,06 |
0,73±0,06 |
Примечание. ٭- P ≤ 0,05.
Объективная оценка токсических свойств риказола также включала определение гематологических и биохимических показателей крыс. Состояние крови - важный компонент токсикологических исследований.
Результаты определения гематологических показателей белых крыс обобщены в таблице 3.
3. Влияние риказола на гематологические показатели крыс при внутримышечном введении в течение 7 сут (n = 10)
Показатель |
Дозы, мг/кг (по препарату) |
Контроль |
||
250 |
125 |
50 |
|
|
Эритроциты, 1012/л |
7,56±0,14 |
7,02±0,54 |
8,37±0,14 |
7,86±0,16 |
Гематокрит, % |
37,18±2,66* |
42,69±0,50 |
44,51±0,78 |
43,95±1,27 |
Гемоглобин, г/л |
118,07±8,87* |
136,80±1,97 |
143,87±1,94 |
141,40±3,96 |
Тромбоциты, 109/л |
818,60±62,52 |
934,30±40,39 |
1134,00±25,64 |
1068,20±38,85 |
Лейкоциты, 109/л |
2,58±0,75* |
6,74±0,99* |
8,36±0,55 |
10,86±0,84 |
СОЭ мм/ч |
0,40±0,14 |
0,60±0,16 |
0,50±0,18 |
0,30±0,05 |
|
Лейкограмма |
|||
Палочкоядерные |
0 |
0,70±0,23 |
0,87±0,29 |
0,90±0,34 |
Сегментоядерные нейтрофилы, % |
3,40±0,98* |
7,30±1,84* |
17,00±3,30 |
29,30±4,72 |
Эозинофилы, % |
0 |
0 |
0 |
0,40±0,22 |
Моноциты, % |
8,50±0,70* |
7,20±1,16 |
5,10±1,30 |
4,70±0,82 |
Лимфоциты, % |
88,10±2,04* |
84,80±8,54 |
77,03±3,56 |
64,70±3,66 |
Примечание. ٭- P ≤ 0,05.
Как следует из приведенных данных, при внутримышечном введении препарата животным в дозе 250 мг/кг массы животного 7 сут подряд отмечено уменьшение количества гематокрита, гемоглобина, лейкоцитов.
Также наблюдали изменения в лейкограмме: уменьшение содержания сегментоядерных нейтрофилов - 3,40±0,98 % против 29,30±4,72 % в контрольной группе. Кроме того, отмечали повышение содержания моноцитов и лимфоцитов - соответственно 8,50±0,70 и 88,10±2,04 % против 4,70±0,82 и 64,70±3,66 % в контролеп.
При введении препарата в дозе 125 мг/кг было установлено уменьшение содержания эритроцитов и лейкоцитов, число которых составило 7,02±0,54 × 1012/л и 6,74±0,99 × 109/л против данных контроля 7,86±0,16 × 1012/л и 10,86±0,84 × 109/л соответственно. В лейкограмме отмечали снижение уровня сегментоядерных нейтрофилов до 7,30±1,84 %. Доза 50 мг/кг массы животного не оказывала достоверного влияния на гематологические показатели крыс.
Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод о том, что препарат в дозах 250 и 125 мг/кг оказывает негативное влияние на костномозговое кроветворение. Установленный лимфоцитоз, вероятно, связан с развитием лейкопении. Число лимфоцитов не изменяется, однако из-за уменьшения числа нейтрофилов в процентном соотношении число лимфоцитов увеличивается. Наблюдаемый эффект называют относительным лимфоцитозом. Он возникает в результате истинной нейтропении.
В таблице 4 приведены результаты определения биохимических показателей сыворотки крови белых крыс после многократного введения риказола.
4. Влияние риказола на биохимические показатели крови
Показатель |
Дозы, мг/кг |
Контроль |
||
250 |
125 |
50 |
||
Билирубин общий, мкмоль/л |
9,38+1,70* |
15,63+1,32* |
21,49+1,86 |
22,52+2,61 |
Билирубин прямой, мкмоль/л |
1,50+0,30* |
3,94+0,59 |
4,25+0,58 |
3,64+0,47 |
АСТ, Ед/л |
238,40+18,82 |
311,00+25,77 |
336,09+10,19 |
344,80+46,53 |
АЛТ, Ед/л |
46,80+2,56* |
49,20+3,67* |
52,64+1,92 |
77,50+12,66 |
Мочевина, ммоль/л |
5,95+0,76* |
6,29+0,21* |
9,63+4,00 |
7,25+0,10 |
Креатинин, мкмоль/л |
64,60+9,92 |
52,60+0,89 |
55,45+3,48 |
59,80+2,72 |
Общий белок, г/л |
60,60+4,13* |
63,70+1,05* |
73,45+1,68 |
69,50+1,45 |
ЩФ, Ед/л |
69,80+9,82* |
191,09+13,41* |
221,50+53,73 |
235,80+10,53 |
α- амилаза, Ед/л |
115,54+20,83* |
225,20+37,09* |
737,60+37,63 |
950,60+79,55 |
Глюкоза, ммоль/л |
3,62+0,74* |
2,51+0,18* |
2,04+0,23 |
1,84+0,34 |
ЛДГ, Ед/л |
1677,00+86,90* |
1636,91+17,70* |
1720,00+212,30* |
1849,30+34,94 |
Примечание. ٭- P ≤ 0,05.
Как следует из приведенных данных, при введении препарата в дозах 250 и 125 мг/кг произошло статистически достоверное снижение уровня общего билирубина, активности аланинаминотрансферазы, уровня мочевины, общего белка, активности щелочной фосфатазы, α-амилазы и лактатдегидрогеназы. Также, в дозе 250 мг/кг регистрировали повышение уровня глюкозы в крови опытных животных.
Данные изменения указывают на то, что препарат в увеличенных дозах оказывает гепатотоксическое воздействие на организм животных. Увеличение содержания лактатдегидрогеназы может свидетельствовать о наличии мышечной дистрофии.
Суммируя полученные результаты исследования подострого опыта, можно сделать заключение, что доза риказола 250 мг/кг при введении крысам в течение 7 сут является токсичной, доза 125 мг/кг – пороговой, 50 мг/кг – недействующей.
Литература
1. Rukovodstvo po jeksperimental'nomu (doklinicheskomu) izucheniju novyh farmakologicheskih veshhestv. – M., 2000.
2. Belen'kij M.D. Jelementy kolichestvennoj ocenki farmakologicheskogo jeffekta. – L.: Gosmedizdat, 1963. – 152 s.
3. Piralishvili I.S. K metodike podscheta jeozinofilov v perifericheskoj krovi // Lab. delo. – 1962. – № 3. – S. 20–22.
4. Prikaz MZ SSSR № 755 ot 12.08.77 g. «Pravila provedenija rabot s ispol'zovaniem jeksperimental'nyh zhivotnyh».