Скачать статью в PDF формате
English version
Фармакология, токсикология
УДК 619:615.9
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОГО КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА ВИГИСОКС
А.И. ВАРЛАМОВА
аспирант
Н.В. ДАНИЛЕВСКАЯ
доктор ветеринарных наук
Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехно- логии им. К.И. Скрябина
Изучены токсикологические свойства нового комплексного антигельминтика вигисокса. Препарат относится к малоопасным веществам. При введении в желудок ЛД50 составляет для белых крыс свыше 6000 мг/кг и белых мышей –10000 мг/кг. Вигисокс не про- являет местно-раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки и при введении в трехкратно уве- личенной дозе не влияет на общее состояние, поведе- ние животных, прием корма и воды, динамику приро- ста массы тела и гематологические показатели.
Ключевые слова: вигисокс, острая и субхроническая токсичность, раздражающее действие.
Для расширения ассортимента отечественных противопаразитарных средств на базе ВНИИ гельминтологии им. К.И. Скрябина разработан новый комплексный препарат вигисокс, содержащий в качестве ДВ фенасал и фен- бендазол.
Препарат представляет собой светло-желтый порошок со слабым специ- фическим запахом. Препарат применяют перорально.
Одна из основных задач, возникающих при изучении токсического дей- ствия препарата, – выявление побочных нежелательных эффектов и исклю- чение отдаленного действия на организм животных [1, 3, 6].
Доклиническое изучение токсикологических свойств лекарственных средств для животных включает определение токсических доз и переносимо- сти препарата лабораторными животными; выявление наиболее чувствитель- ных к препарату органов и систем организма, характера и степени патологи- ческих изменений в них и обратимости вызываемых повреждений; определе- ние зависимости токсических эффектов от дозы и длительности применения фармакологического средства.
Учитывая требования, предъявляемые к безопасности антигельминтных средств для животных [6], одним из этапов наших исследований было изуче- ние в опытах на лабораторных животных токсикологических свойств ви- гисокса, предназначенного для лечения и профилактики цестодозов и нема- тодозов крупного и мелкого рогатого скота.
Материалы и методы
Препарат вводили лабораторным животным в виде суспензии на крах- мальном геле. В опытах использовали 40 белых мышей, 68 крыс и 3 кроли- ков. Исследования проводили в соответствии с «Руководством по экспери- ментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических ве- ществ» [4].
Для определения параметров острой токсичности препарата использова- ли белых мышей обоего пола массой 19–21 г и белых крыс массой 180–220 г. Животных содержали в виварии согласно санитарным правилам и на стан- дартном рационе с использованием сухого брикетированного корма. Подго- товку к опыту белых мышей проводили в соответствии с указаниями ОФС
«Испытание на токсичность» ГФ XI.
Перед опытом животных в течение 6 ч выдерживали на голодной диете, после чего взвешивали и распределяли по группам. Устанавливали перено- симые и токсические дозы, выявляли наиболее чувствительные к вигисоксу органы и системы организма, характер и степень патологических изменений в них, обратимость вызываемых поражений.
Для установления параметров острой токсичности препарат вводили од- нократно (в максимальной дозе дробно с интервалом 1 ч) в желудок с помо- щью шприца с оливой в дозах: белым крысам – 3000 и 6000 мг/кг, мышам – 8000 и 10000 мг/кг.
Каждую дозу препарата испытывали на 6 крысах и 10 мышах, контроль- ным мышам вводили воду в том же объеме. Наблюдения проводили в тече- ние 1 мес, в первые сутки – непрерывно. Фиксировали общее состояние жи- вотных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, координацию движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыха- тельных движений, ритм сердечных сокращений, состояние кожно- волосяного покрова, окраску слизистых оболочек, положение хвоста, количе- ство и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания, окраску мо- чи, потребление корма и воды.
Для расчета средней смертельной дозы использовали метод пробит- анализа по Литчфилду и Уилкоксону [1].
Исследование субхронической токсичности препарата проводили на бе- лых крысах исходной массой 130–140 г, из которых сформировали 4 группы по 10 животных в каждой. Препарат вводили мышам ежедневно в течение 7 сут в дозах 1/5, 1/10 и 1/20 от ЛД50, установленной в остром опыте. Живот- ным контрольной группы ежедневно вводили 1%-ный крахмальный клейстер в объеме 3 мл. В процессе опыта ежедневно регистрировали массу крыс, вы- являли наиболее чувствительные к препарату органы и системы организма, характер, степень и обратимость патологических изменений. На 8-е сутки животных декапитировали и отбирали пробы крови (с и без антикоагулянта) для последующих гематологических и биохимических исследований. Извле- кали печень, почки, сердце, легкие, селезенку и проводили взвешивание.
Влияние суспензии на организм животных оценивали по количеству эритроцитов и лейкоцитов, которое определяли с помощью камеры Горяева, уровень гемоглобина – фотометрическим методом.
Биохимические исследования проводили на анализаторе «Spekol 220/221» (Германия). В сыворотке крови определяли активность аланинами- нотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ), мочевины и креатинина.
Изучение острой накожной токсичности вигисокса проводили на белых крысах-самцах массой тела 180–220 г. За 1–2 сут до эксперимента кожу жи- вотных освобождали от шерстного покрова. Препарат в виде водной суспен- зии на крахмальном геле наносили на поверхность кожи размером 5×5 см одно- кратно в дозах 3000 и 6000 мг/кг. В течение 14 сут вели наблюдение за состояни- ем и поведением животных в отношении проявления симптомов интоксикации; оценивали физиологические функции, реакцию на раздражители и т. п.
Раздражающее действие вигисокса на кожу оценивали при нанесении препарата в дозах 3000 и 6000 мг/кг при оценке острого токсического дей- ствия. Исследовали состояние кожи, обращая особое внимание на покрасне- ния кожи, наличие трещин, изъязвлений, кровоизлияний, появление сухой
корки и т. д. Состояние кожи оценивали с учетом развития возможной эритемы и интенсивности отека кожи (по измерению толщины кожной складки в мм) [4].
Исследование действия вигисокса на слизистую оболочку глаза прово- дили на 3 взрослых кроликах, которым в левый глаз вносили 1%-ную суспен- зию вигисокса, а правый глаз служил контролем. 1–2 капли вигисокса вноси- ли в конъюнктивальный мешок однократно с помощью пипетки.
Состояние глаз контролировали через 15 мин; 1; 24; 48 и 72 ч после вне- сения 1%-ного раствора вигисокса. Обследование проводили визуально.
Данные по всем видам исследований обрабатывали статистически по ме- тоду Фишера–Стьюдента с использованием t-критерия [5].
Результаты и обсуждение
Введение вигисокса в максимальных дозах 6000 и 10000 мг/кг не приве- ло к изменению общего состояния крыс и мышей. Они сохраняли обычную двигательную активность, охотно потребляли корм и воду, признаков инток- сикации не отмечали. В связи с этим ЛД50 приняли равной свыше 6000 мг/кг при введении в желудок крысам и 10000 мг/кг – белым мышам.
При установлении параметров острой токсичности при введении в желу- док на двух видах животных было установлено, что вигисокс относится к 4 классу опасности (ГОСТ 12.1.007-76).
При аппликации вигисокса на кожу в дозах 3000 и 6000 мг/кг у живот- ных наблюдали адекватную реакцию на нанесение чужеродного вещества, однако каких-либо симптомов интоксикации, изменений состояния и поведе- ния крыс не отмечали в течение всего периода наблюдений [7].
Гибель крыс при применении препарата в указанных дозах не наблюда- ли. Вместе с тем, доза 6000 мг/кг была максимально возможной для апплика- ции на кожу.
Критерии и результаты оценки препарата приведены в таблице 1.
1. Результаты изучения раздражающего действия вигисокса на кожу и слизистые оболочки
|
Признаки раздражающего действия на кожу |
Наличие или отсутствие (+/–) |
|
Эритема |
– |
|
Увеличение кожной складки |
– |
|
Трещины, изъязвления и т. п. |
– |
|
Температура кожи |
В норме |
Как следует из приведенных в таблице 1 данных, препарат с использова- нием вышеуказанных критериев не оказывал отрицательного воздействия на неповрежденную кожу крыс. Примерно через 10 сут после нанесения препа- рата кожа покрылась ровным шерстным покровом.
Кроме того, оценивали влияние препарата на конъюнктиву глаза при внесении 1%-ной суспензии препарата кроликам. За исключением адекватной реакции у животных на внесение инородного тела, никаких других признаков не наблюдали, включая таковые, свидетельствующие о раздражающем действии препарата (покраснение, слезотечение, отечность, инъекция склеры и т. п.).
Таким образом, вигисокс не проявил раздражающего действия на непо- врежденную кожу крыс и слизистую оболочку глаз кроликов.
При ежедневном введении вигисокса в трех тестированных дозах (1200, 600 и 300 мг/кг) внешних признаков токсикоза и гибели крыс не наблюдали в течение всего опытного периода. Шерстный покров был чистым и блестя- щим. Животные охотно потребляли корм и воду; отсутствовало возбуждение или угнетение, мышечные подергивания, тремор, парезы, выделения из носа, глаз, ротовой полости или иные признаки интоксикации.
В таблице 2 приведены данные по динамике прироста массы тела у опытных и контрольных крыс.
2. Динамика прироста массы тела у крыс при пероральном введении вигисокса в течение 7 сут (n = 6, P ≥ 0,05)
|
||||||||||||||||||||||||
В ходе патоморфологического исследования макроскопических измене- ний органов и тканей выявлено не было.
В подопытной и контрольной группах белые крысы имели блестящую прилегающую шерсть; упитанность была хорошей; слизистые оболочки влажные, блестящие; неповрежденные кожные покровы и костный скелет. Расположение внутренних органов правильное. Серозные оболочки гладкие, влажные, серые. Полости сердца, вены и венозные синусы наполнены темной жидкой кровью. Границы серого и белого вещества головного и спинного мозга четкие. Ткань мозга блестит на разрезах, очаговые изменения в ней от- сутствуют. Желудочки мозга щелевидные, с серыми, дряблыми, сосудистыми венозными сплетениями и небольшим количеством прозрачной жидкости. Гипофиз округлый, бледно-серый. Щитовидная железа с симметричным рас- положением долей, дряблая, красного цвета. Слюнные железы инкапсулиро- ваны, плотные, серые, дольчатые. Вилочковая железа серого цвета с экхимо- зами под капсулой. Селезенка с гладкой капсулой, плотная; пульпа без со- скоба. Печень плотная, с гладкой капсулой, кровенаполненная, красно- коричневая. Поджелудочная железа в капсуле, плотная, серая. Надпочечники овальной формы, плотные, с четким делением паренхимы на мозговой и кор- ковый слои. Почки плотные, с гладкой поверхностью, легко снимающейся капсулой, четкой границей красной коры и бледно-серого мозгового слоя, гладкой слизистой оболочкой лоханок и мочевого пузыря. В трахее и глав- ных бронхах следы слизи, слизистая оболочка их гладкая, блестящая. Легкие воздушные, покрыты тонкой плеврой серого цвета, кровенаполнение перед- ненижних долей неравномерное. Сердце плотное, с полупрозрачными глад- кими створками клапанов и гладким эндокардом, серо-красным, сочным, без очаговых изменений миокардом, умеренным количеством экхимозов под эпикардом, обычным рисунком расположения коронарных артерий и вен. Интима ствола легочной артерии и аорты гладкая, блестящая. Пищевод про- ходим, слизистая оболочка его гладкая, белесоватая. Желудок формы рога с тонкими стенками, рельефными, серыми складками слизистой оболочки, без каких-либо очаговых изменений. Кишечник содержит окрашенный желчью химус и кашицеобразные, коричневые каловые массы. Стенки его тонкие, слизистая оболочка тонкого кишечника бархатистая, розовая, толстого ки- шечника – серая, складчатая, очаговых изменений не обнаружено. Желчные пути проходимы, стенки желчного пузыря тонкие, в просвете темно- оливковая желчь, слизистая оболочка его гладкая.
По данным макроскопического исследования токсико-аллергического действия препарата на животных не выявлено. В связи с этим было принято решение не проводить микроскопические исследования.
В таблице 3 приведены значения массовых коэффициентов органов крыс, получавших вигисокс в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки.
Как следует из данных таблицы 3, массовые коэффициенты органов у животных подопытных групп колебались в пределах контрольных значений и физиологической нормы для данного вида животных. В частности, значение
относительной массы печени у крыс, получавших вигисокс в дозах 1/5, 1/10 и 1/20 от ЛД50, составило 12,57±0,45 г; 12,68±0,35 и 12,64±0,33 г против кон- трольного значения 12,83±0,26 г; почек – 1,94±0,03 г; 2,01±0,07 и 1,84±0,03 г против 2,03±0,05 г в контроле и сердца – 1,17±0,083 г; 1,09±0,068 и 1,19±0,062 г против 1,25±0,044 г в контроле.
3. Влияние вигисокса на массовые коэффициенты органов при введении в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки в течение 7 сут (n = 6, P ≥ 0,05)
|
Орган |
Контроль |
Масса (г) органа крыс при введении препарата в дозах, мг/кг |
||
|
1200 |
600 |
300 |
||
|
Головной |
1,96±0,071 |
2,01±0,043 |
1,96±0,070 |
2,02±0,041 |
|
мозг |
|
|
|
|
|
Сердце |
1,25±0,044 |
1,17±0,083 |
1,09±0,068 |
1,19±0,062 |
|
Печень |
12,83±0,26 |
12,57±0,45 |
12,68±0,35 |
12,64±0,33 |
|
Легкие |
2,21±0,21 |
2,04±0,15 |
2,23±0,17 |
2,07±0,8 |
|
Почки |
2,03±0,05 |
1,94±0,03 |
2,01±0,07 |
1,84±0,03 |
|
Селезенка |
1,14±0,14 |
0,81±0,3 |
1,10±0,15 |
1,24±0,7 |
|
Семенники |
2,67±0,5 |
2,58±0,3 |
2,83±0,9 |
2,61±0,6 |
В таблице 4 приведены результаты определения наиболее информатив- ных гематологических показателей у крыс, получавших вигисокс в трех до- зах, и у контрольных животных. Препарат в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки не оказал достоверного влияния на гематологические показатели. В частно- сти, уровень гемоглобина у крыс, получавших вигисокс в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки, достигал 10,62±1,74 г%, 9,71±2,21 и 11,70±0,97 г% против контрольного значения 9,77±1,92 г%; количество эритроцитов составляло 4,59±0,95 млн/мм3, 5,83±0,52 и 5,34±0,43 млн/мм3 против 5,63±0,88 млн/мм3;
число лейкоцитов равнялось 6,80±1,82 тыс./мм3, 7,73±1,44 и 6,91±2,00 тыс./мм3 против 8,11±2,46 тыс./мм3.
4. Влияние вигисокса в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки в течение 7 сут на гематологические показатели крыс (n = 6, Р ≥ 0,05)
|
Показатель |
Значение показателя при введении препарата в дозах, мг/кг/сутки |
Контроль |
||
|
1200 |
600 |
300 |
||
|
Гемоглобин, г/% |
10,62±1,74 |
9,71±2,21 |
11,70±0,97 |
9,77±1,92 |
|
Эритроциты, 106/мм3 |
4,59±0,95 |
5,83±0,52 |
5,34±0,43 |
5,63±0,88 |
|
Тромбоциты, 103/мм3 |
262,35±23,21 |
289,25±20,19 |
256,71±26,17 |
277,55±27,41 |
|
Лейкоциты, 103/мм3 |
6, 80±1,82 |
7,73±1,44 |
6,91±2,00 |
8,11±2,46 |
|
Средний объем эритроцитов, мкм3 |
62,00±1,08 |
61,50±0,64 |
61,25±0,73 |
60,50±0,50 |
|
Гематокрит, % |
32,60±4,95 |
30,17±2,55 |
35,47±3,15 |
38,45±4,46 |
|
Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, ПК |
23,25±2,07 |
20,72±0,38 |
21,34±1,11 |
22,20±1,95 |
|
Морфология крови |
||||
|
Лимфоциты, % |
69,25±0,94 |
69,00±3,11 |
68,00±2,74 |
71,00±2,86 |
|
Эозинофилы, % |
3,25±0,47 |
3,25±0,85 |
3,00±0,24 |
2,75±0,47 |
|
Моноциты, % |
2,25±0,47 |
4,00±0,70 |
2,75±0,65 |
3,00±0,91 |
|
Сегментоядерные,% |
25,25±0,47 |
23,75±3,42 |
26,25±3,01 |
23,25±3,06 |
Важно отметить, что введение вигисокса не привело к изменению лейко- граммы.
В таблице 5 приведены биохимические показатели сыворотки крови крыс, которым вводили вигисокс в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки, и у кон- трольных животных.
5. Влияние вигисокса в дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки при введении в те- чение 2 мес на биохимические показатели крыс (n = 6, Р ≥ 0,05)
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
В целом, протестировано 10 биохимических показателей, отражающих состояние белкового, жирового и углеводного обмена.
Функциональное состояние почек не претерпело отрицательных измене- ний при введении вигисокса в трех различных дозах, поскольку уровень кре- атинина и мочевины был сравним с контрольными значениями.
Суммируя в целом данные можно констатировать, что вигисокс в трех тестируемых дозах 1200, 600 и 300 мг/кг/сутки не изменял общего состояния и поведения животных, прием корма и воды, динамику прироста массы тела и гематологические показатели.
На основании вышеизложенного, можно сделать вывод, что вводимые дозы (1200, 600 и 300 мг/кг) безопасны для организма крыс при многократ- ном повторном введении.
Литература
1. Беленький М.Д. Элементы количественной оценки фармакологиче- ского эффекта. – Л.: Медгиз, 1963. – 151 с.
2. Веселова Т.П. К вопросу сравнительной токсичности антгельминти- ков // Матер. докл. науч. конф. Всес. о-ва гельминтол. – М., 1964. – Ч. 1. – С. 58–61.
3. Жуленко В.Н., Рабинович М.И., Таланов Г.А. Ветеринарная токсиколо- гия. – М.: Колос, 2001. – 384 с.
4. Методические указания к постановке исследований по изучению раз- дражающих свойств и обоснованию предельно допустимых концентраций избирательно действующих раздражающих веществ в воздухе рабочей зоны.
– М., 1980. – 18 с.
5. Плохинский Н.А. Руководство по биометрии для зоотехников. – М., 1969.
6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. – М., 2000.
7. Суворов С.В., Чернышова В.И. К вопросу о количественной оценке гиперемии, как показателя интенсивности и воспаления // Вестник дермато- логии и венерологии. – 1974. – № 6. – С. 22–24.
© 2015 The Author(s). Published by All-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants named after K.I. Skryabin.
This is an open access article under the Agreement of 02.07.2014 (Russian Science Citation Index (RSCI)) and the Agreemnt of 12/06/2014 (CABI org / Human Sciences section)