Фармакология, токсикология
УДК 616:619.995.132
DOI: 10.12737/11779
Поступила в редакцию 26.02.2015
Принята в печать 24.03.2015
Скачать статью в PDF формате
English version
Оценка эмбриотропных свойств антигельминтика митранокса
С. А. Козлов, М. Б. Мусаев
Всероссийский научно-исследовательский институт фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К. И. Скрябина 117218, Москва, ул. Б.Черемушкинская, д. 28, e-mail: musaev@vniigis.ru
Реферат
Цель исследования – оценить возможные эмбриотропные свойства антигельминтика митранокса.
Материалы и методы. Опыты проводили на 70 белых беспородных беременных крысах-самках, которых распределили на 6 подопытных и одну контрольную группы по 10 животных в каждой. Препарат вводили беременным самкам 1, 2 и 3-й подопытных групп в форме суспензии в 1%-ном крахмальном клейстере в терапевтической (100 мг/кг), а крысам 4, 5 и 6-й групп – в трехкратно увеличенной (300 мг/кг) дозах перорально в критические периоды эмбриогенеза: с 1–6; 7–14 и 15–19 сутки беременности. Контрольная группа беременных самок получала суспензию 1%-ного крахмального клейстера. На 20-е сутки эмбриогенеза все беременные животные были убиты декапитацией, а эмбрионы исследованы в соответствии с Методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ», «Методическим указаниям по гигиенической оценке новых пестицидов», и правилам лабораторной практики в Российской Федерации.
Результаты. При исследовании внутренних органов патологических изменений не обнаружено. Признаки уродств и других отклонений у эмбрионов и плацент отсутствовали. Препарат не оказывает эмбриотоксического эффекта, так как масса и размеры плодов не отличались от таковых у контрольных животных. Пред- и постимплантационная гибель и общая эмбриональная смертность у крыс подопытных групп не отличались от показателей контрольных животных. При измерении средних размеров зачатков костной системы у эмбрионов не отмечено тератогенного действия препарата.
Ключевые слова: антигельминтик, митранокс, эмбриотоксичность, тератогенность, предимплантационная и постимплантационная гибель, эмбриональная смертность, уродства.
Введение
Митранокс – новый отечественный антигельминтный препарат, обладающий цестодоцидным и нематодоцидным действиями [3]. Относится к группе ацетиллированных салициланнилидов. В химическом отношении – 4,6-дихлор-2-(3,4-дихлорфенилкарбамоил) фенилацетат [11]. Препарат представляет собой белый с кремовым оттенком порошок, без вкуса, в воде не растворим, молекулярная масса 377,06, предназначен для перорального применения. Препарат разработан совместно с СПХФА и ИМПИТМ им. Е. И. Марциновского.
По данным доклинических исследований митранокс на основании ГОСТа 12.10007-76 относится к 3 классу умеренно опасных веществ по степени воздействия на организм при введении в желудок белым мышам и крысам [2], а также по принятой классификации химических веществ обладает умеренным кумулятивным свойством (Ккум. = 3,2) [4].
По результатам изучения острой накожной токсичности он относится к классу малоопасных веществ, не оказывает отрицательного воздействия на неповреждённую кожу [6] и существенного раздражающего действия на конъюнктиву глаз [5].
Учитывая относительную дешевизну синтеза митранокса, его слабую токсичность и широкую антигельминтную активность, целью данной работы было продолжение одного из этапов изучения препарата на эмбриотропную активность.
Материалы и методы
Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия митранокса проводили в виварии Всероссийского научно-исследовательского института фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К. И. Скрябина. Исследования проводили в соответствии с Методическими рекомендациями Фармакологического Государственного комитета «Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [10], «Методическим указаниям по гигиенической оценке новых пестицидов» [7] и правилам лабораторной практики в Российской Федерации [1, 9].
В опыт подобрали 70 беременных самок белых беспородных крыс и 10 самцов, которых содержали отдельно. К 5 самкам подсаживали одного самца и первым денём беременности самок считали день обнаружения сперматозоидов во влагалищном мазке.
Беременных самок крыс распределяли на 7 групп по 10 животных в каждой. Первым трем группам самок препарат вводили в терапевтической дозе 100 мг/кг, а крысам 4, 5 и 6-й групп – в три раза увеличенной дозе 300 мг/кг на 1–6, 7–14 и 15–19-е сутки беременности соответственно. Митранокс вводили в форме 1%-ного крахмального клейстера в желудок с помощью специального зонда. Животные 7-й группы получали 1%-ную суспензию крахмала без препарата и служили контролем.
На протяжении всего периода беременности за животными вели наблюдение. Принимали во внимание наличие признаков интоксикации, состояние видимых слизистых оболочек и шерстного покрова, акт приема корма и воды. Взвешивание животных проводили ежедневно.
Животных убивали на 20-е сутки беременности декапитацией.
После лапаратомии обращали внимание не только на органы-мишени (эмбрионы, плодные оболочки, плаценты, яичники), но и на все внутренние органы, проводя макроскопическое исследование.
После эктирпации матки учитывали число эмбрионов, резорбций и желтых тел; измеряли краниокаудальные размеры эмбрионов и плацент и регистрировали их массу, определяли пол. Также обращали внимание на наличие уродств и аномалий развития у эмбрионов.
Тератогенное действие препарата оценивали с использованием метода J. G. Wilson (1965) в модификации отдела эмбриологии ИЭМ РФ. Одну группу плодов фиксировали в жидкости Буэна в течение 14 сут для изучения аномалий внутренних органов плодов по методу Вильсона, другую – в 96º спирте в течение 7 сут для изучения состояния развития скелета методом Даусона [8].
Осматривали, измеряли и взвешивали плаценту и с учётом массы эмбрионов определяли плодоплацентарный коэффициент по формуле:
Масса плаценты/Масса плода × 100
Для оценки эмбритоксической активности препарата учитывали пред- и постимплантационную гибель и общую эмбриональную смертность в процентах.
Показателями тератогенного действия являлись нарушения органогенеза во внутриутробном периоде и изменения костной системы плода.
Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием программы Стюдент 200. За статистически значимые изменения был взят общепринятый уровень достоверности Р ≤ 0,05.
Результаты и обсуждение
В течение всего периода беременности признаков интоксикации у подопытных животных не наблюдали. Животные были активны, охотно поедали корм и хорошо набирали массу.
При макроскопическом исследовании внутренних органов каких-либо патологических изменений не обнаружено. Признаки воспаления, уродства и другие отклонения от нормы у эмбрионов и плацент отсутствовали.
Результаты исследования эмбрионального материала при введении беременным крысам митранокса в дозах 100 и 300 мг/кг в критические периоды эмбриогенеза сведены в таблицу 1, из которой следует, что препарат не оказывает эмбриотоксического эффекта. Об этом свидетельствуют значения массы и размер плодов, а также отсутствие аномалий в развитии скелета. Краниокаудальные размеры, масса эмбрионов, а также диаметр и масса плацент самок крыс подопытных групп не отличались от таковых животных контрольной группы.
Пред- и постимплантационная гибель и общая эмбриональная смертность у крыс, которым вводили митранокс в терапевтической и 3 раза увеличенной дозах в критические периоды эмбриогенеза не превышали значения у животных контрольной группы.
На срезах у подопытных и контрольных эмбрионов самок крыс отмечали идентичность топографии пищеварительного тракта, спинного мозга, крупных сосудов, сердца, лёгких, бронхов, печени, поджелудочной железы, почек, органов малого таза и скелета.
Длина участков окостенения в закладках основных костей эмбрионов, размеры зачатков лопаточной, плечевой, локтевой, лучевой, а также бедренной, большой и малой берцовых костей у опытных плодов находились в пределах, близких таковым у животных контрольной группы (табл. 2).
Заключение
Митранокс в терапевтической (100 мг/кг) и в 3 раза увеличенной дозе (300 мг/кг) при внутрижелудочном введении в критические периоды эмбриогенеза самок крыс не проявил эмбриотоксической и тератогенной активности.
Литература
1. Государственная фармакопея. – Т. Х1, Вып.2. – М.,1968.- 1079 с.
2. Козлов С. А., Мусаев М. Б., Михайлицин Ф. С., Севбо Д. П., Трусов С. Н. Изучение острой токсичности митранокса // Мед. паразитол. и паразит. бол. – 2013. – № 3. – С. 47–48.
3. Козлов С. А., Мусаев М. Б. Антигельминтная эффективность и титрация терапевтических доз отечественного антигельминтика митранокса при мониезиозе и нематодозах овец // Рос. паразитол. журнал. – 2014. – № 4. – С. 114–116.
4. Козлов С. А., Мусаев М. Б., Михайлицин Ф. С., Севбо Д. П., Трусов С. Н. и др. Экспериментальное изучение кумулятивных свойств нового препарата митранокса // Мед. паразитол. и паразит. бол. – 2013. – № 3. – С. 53–55.
5. Козлов С. А., Мусаев М. Б. Оценка раздражающего действия митранокса и надината на слизистую глаз // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». – 2014. – Вып. 15. – С.109–110.
6. Козлов С. А., Мусаев М. Б. Параметры острой накожной токсичности и раздражающего действия митранокса и надината // Матер. докл. науч. конф. Всерос. о-ва гельминтол. РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». – 2014. – Вып. 15. – С.110–112.
7. Методические указания по гигиенической оценке новых пестицидов. – Киев, 1988. – С. 32–35.
8. Дыбан А. П., Баранов В. С., Акимова И. М. Архив Анатомии Гистологии и Эмбриологии. – 1970. – Т. 59, № 10. – 191с.
9. Правила лабораторной практики в Российской Федерации: Приказ министерства здравоохранения РФ, №708н от 23.08.2010.
10. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р. У. Хабриева. – М.: Медицина, 2005.-829с.
© 2015 The Author(s). Published by All-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants named after K.I. Skryabin.
This is an open access article under the Agreement of 02.07.2014 (Russian Science Citation Index (RSCI)) and the Agreemnt of 12/06/2014 (CABI org / Human Sciences section)