Скачать статью в PDF формате
УДК 619.616.993.192.6
DOI: 10.31016/1998-8435-2018-12-3-47-54
Диагностика анаплазмоза крупного рогатого скота методом ПЦР в реальном времени
Анна Леонидовна Архипова 1, Анна Владимировна Бабий 2,
Андрей Владимирович Архипов 3, Светлана Николаевна Ковальчук 4
1–4 Центр экспериментальной эмбриологии и репродуктивных биотехнологий, 127422, Москва, ул. Костякова, д. 12, стр. 4,
e-mail: info-ceerb@mail.ru
Поступила в редакцию: 04.04.2018; принята в печать: 17.09.2018
Аннотация
Цель исследования: разработка метода ПЦР в реальном времени для диагностики анаплазмоза крупного рогатого скота.
Материалы и методы. Для разработки праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для ПЦР в реальном времени были исполь-
зованы имеющиеся в базе данных Генбанк (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/) последовательности гена msp1α 57 изолятов
Anaplasma marginale. Выявление консервативных участков гена msp1α проводили с помощью программы Сlustal Omega (https://
www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalo/). Cпецифичность праймеров и зонда была проверена in silico с использованием программы BLASTN
(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) экспериментально на образцах крови животных, инфицированных анаплазмами A. ovis,
A. centrale, A. bovis, A. phagocytophilum и A. platys, и секвенированием ампликонов методом Сэнгера. Для оценки чувствительности
метода была использована сконструированная нами плазмида pGEM-msp1α, содержащая фрагмент гена msp1α длиной 207 п.н.
Результаты и обсуждение. Разработан метод ПЦР в реальном времени для выявления возбудителя анаплазмоза крупного рога-
того скота A. marginale. Были разработаны праймеры и флуоресцентно-меченый зонд для амплификации и детекции фрагмен-
та гена msp1а длиной 207 п.н. и оптимизированы условия ПЦР. Чувствительность метода позволяет выявлять одну копию гена
msp1а А. marginale в анализируемом образце ДНК. Специфичность метода позволяет дифференцировать A. marginale от других
видов анаплазм (A. ovis, A. bovis, A. centrale, A. phagocytophilum, A. platys). Разработанный метод может быть использован для об-
наружения и количественной оценки А. marginale в образцах крови инфицированных животных с целью подтверждения диагноза, а
также при проведении эпизоотологического мониторинга анаплазмоза крупного рогатого скота.
Ключевые слова: крупный рогатый скот; анаплазмоз; Anaplasma marginale; ПЦР в реальном времени.
Для цитирования: Архипова А. Л., Бабий А. В., Архипов А. В., Ковальчук С. Н. Диагностика анаплазмоза крупного рогатого скота
методом ПЦР в реальном времени // Российский паразитологический журнал. 2018. Т. 12. № 3. С. 47–54.
DOI: 10.31016/1998-8435-2018-12-3-47-54
© Архипова А. Л., Бабий А. В., Архипов А. В., Ковальчук С. Н.