English version
К ВОПРОСУ ИММУНОДИАГНОСТИКИ ДИРОФИЛЯРИОЗА
У ЛЮДЕЙ И ЖИВОТНЫХ
Бескровная Ю.Г., Нагорный С.А., Васерин Ю.И.,
Ярошенко Н.В., Манько Д.В.
ФГУН РостовНИИМП Роспотребнадзора
Введение. Дирофиляриоз может быть отнесен к числу «новых» трансмиссивных паразитарных болезней животных и человека. Одним из главных факторов распространения данной инвазии является миграция больных собак, в крови которых присутствуют микрофилярии. Повсеместное распространение переносчиков (кровососущих комаров) делают передачу данной инвазии возможной везде, где присутствует резервуар болезни и благоприятные климатические условия, необходимые для поддержания жизнеспособности комаров, а также позволяющие личинкам в организме переносчика перейти в инвазионную стадию (Simon F. et al. 2001).
Учитывая, стертые клинические признаки и хроническое течение болезни установление диагноза этого заболевания встречает определенные трудности. Именно поэтому для его постановки приходится прибегать к использованию различных методов лабораторного обследования животных и человека с установлением показателей чувствительности, специфичности. В связи с чем, cерологические методы исследования могут иметь важное значение при диагностике дирофиляриоза у животных и людей.
Цель настоящего исследования состоит в использовании иммунологического метода для изучения распространения дирофиляриоза на юге России среди животных и людей.
Материалы и методы. В работе использовали специфический антиген полученный из неполовозрелой самки D. repens, удаленной хирургическим путем. Проводили последовательно механическую и ультразвуковую гомогенизацию гельминта из замороженного состояния с экстракцией белков в 0,25 М водном растворе сахарозы. Супернатант растворяли в охлажденном ацетоне, центрифугировали и удаляли надосадочную жидкость. Осадок высушивали под вакуумом, растворяли в калий-фосфатном буфере рН 6,4 и центрифугировали. Надосадочную жидкость использовали в ИФА для выявления антител к Dirofilaria repens у людей, инвазированных данным паразитом. На способ приготовления данного антигена получено положительное решение на патент РФ от 25.11.2008 г.
Полученный антиген использовали в концентрации 40 мкг/мл в объеме 100 мкл на лунку. Разведение сывороток 1:200. В ИФА использованы антивидовые конъюгаты против иммуноглобулинов класса G собаки и человека.
Результаты ИФА учитывали на колориметрическом анализаторе «Opsys MR» фирмы Dynex при длине волны 450нм.
За период с 2006 по 2007 гг. было проведено иммунологическое обследование на наличие антител к D. repens 92 сывороток крови домашних собак (случайная выборка) республики Адыгея (г.Майкоп) и Краснодарского края (г.Туапсе), а также 48 здоровых жителей г. Майкопа (республика Адыгея).
Результаты. Результаты иммунологического исследования показали, что из 51 особи г. Туапсе - 10 (19,6±5,5%) были серопозитивными в данной тест системе. Средняя геометрическая титра антител у серопозитивных собак составила 9,8 log2, у серонегативных – 7,8 log2. При клиническом обследовании у 3 животных с высоким уровнем антител в крови был подтвержден диагноз дирофиляриоз. В течение 2-х лет (сентябрь 2006, июль 2007 гг.) сыворотки крови 17 собак г. Туапсе обследовались в данной тест-системе. Из них у двух собак, без клинических признаков болезни, на протяжении этого периода в крови сохранялись одинаково высокие уровни антител к D. repens. Средняя геометрическая титра антител этих животных составила 10,1 log2. Данный факт доказывает достаточно длительное сохранение в крови антител к D. repens.
Из 41 животного г. Майкопа 6 (14,6±4,9%) собак имели в крови высокий уровень антител. При обследовании у 4 серопозитивных собак подтвержден диагноз дирофиляриоз. У 2 животных с высоким уровнем антител в крови диагноз дирофиляриоз подтвержден не был. Средняя геометрическая титра антител у серопозитивных собак составила 9,8 log2, в то время как у серонегативных – 7,2 log2.
С целью изучения иммунологической структуры и определения частоты контакта населения с данным возбудителем было проведено сероэпидемиологическое обследование 48 здоровых жителей г. Майкопа (республика Адыгея). Положительный результат получен у 6 (12,5±4,7%). Средняя геометрическая титра у лиц данной группы составила 9,6 log2. Высокий процент серопозитивных лиц и достаточно высокий титр антител среди них могут указывать на то, что они перенесли заболевание.
Результаты сероэпидемиологического обследования здоровых лиц коррелируют с показателями заболеваемости дирофиляриозом животных на данной территории (табл.).
Таблица. Результаты сероэпидемиологического обследования животных и людей г. Майкопа (республики Адыгея)
|
|
Число обследованных в ИФА |
Из них положительных |
|
|
абс. |
%±m |
||
|
Собаки |
41 |
6 |
14,6±4,9 |
|
Люди |
48 |
6 |
12,5±4,7 |
Примечание: *Р<0,05
Заключение. Полученные данные свидетельствуют, о том, что использование иммунологического метода позволяет определить частоту выявления антител Ig G к соматическому антигену D. repens среди больных и здоровых животных и людей, провести оценку истинной инвазированности населения и животных дирофиляриозом. А сероэпидемиологический метод можно использовать для типизации очагов дирофиляриоза и установления их границ, а также оценки лечебно - профилактических и санитарно-ветеринарных мероприятий.
Литература: Simon F., Claudio G. Heartworm infection in humans and animals. Simon, / Ediciones Universidad de Salamanca. – 2001. – 210p.
© 2015 The Author(s). Published by All-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants named after K.I. Skryabin.
This is an open access article under the Agreement of 02.07.2014 (Russian Science Citation Index (RSCI) and the Agreement of 12.06.2014 (CABI.org / Human Sciences section).