English version
УДК 619:576.8:631.427.2.048.32
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ
НЕМАТОДОЗОВ В ПОЧВЕ
Долбин Д.А.*, Лутфуллин М.Х., Лутфуллина Н.А., Гиззатуллин Р.Р.**
*Казанский НИИ Эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора
**Казанская государственная академия ветеринарной
медицины им. Н. Э. Баумана
Наиболее актуальна оценка загрязненности почвы яйцами нематод часто встречающихся в песке, в частности на детских площадках и в песочницах – Toxocara canis, Toxocara cati и Ascaris lumbricoides.
Самым распространенным методом исследования почвы, с целью выявления яиц гельминтов, является комбинированный метод Романенко, где в качестве флотационной жидкости используется насыщенный раствор нитрата натрия [1].
На основании ранее примененного нами подхода для диагностики паразитозов [2], в данной работе была поставлена задача, разработать новый метод выявления яиц гельминтов и простейших в пробах почвы.
При использовании разработанной методики был проведён сравнительный анализ методов исследования почвы: метода Романенко и разработанного нами метода выявления яиц гельминтов. В пробу песка искусственно вносили яйца Ascaris suum, Toxocara canis и Ascaris lumbricoides в количестве 100 экз. на г песка. Яйца были получены из матки самок аскарид.
Выявление яиц гельминтов в пробах почвы авторским способом проводили по следующей схеме: вначале готовили комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов: 1. насыщенный раствор цинка хлорида (2 кг ZnCl2 на 1 л воды); 2. насыщенный раствор натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды); 3. глицерин (Ч). Далее эти три компонента смешивали в соотношении 1:1:1. Всплывшие крупные частицы сразу же удаляли. После центрифугирования (для этой цели пригодна центрифуга марки ЦЛС-3) в течение 3 мин при 800 – 1000 об./мин воду сливали, а в пробирки добавляли 150 мл трехкомпонентной флотационной системы. Перемешивали палочкой и вновь центрифугировали 3 мин.
Пробирки устанавливали в штатив, доливали тот же раствор до образования выпуклого мениска, накрывали обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 20–30 мин стекло снимали и микроскопировали. С целью повышения эффективности выявления яиц снятие препарата повторяли 2 – 3 раза.
При искусственном внесении в пробу почвы 100 яиц на грамм песка, не содержавшего яиц гельминтов или насекомых, метод Романенко в нашем опыте позволил выявить от 1 до 5 яиц аскарид. Авторский метод от 7 до 12 яиц.
Недостатком данного метода является низкая удельная плотность флотационного раствора. Кроме того, насыщенный раствор нитрата натрия, а так же альтернативные растворы, предлагаемые в литературе (тиосульфата натрия и натриевой селитры) очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает выявление яиц гельминтов.
Эффективность выявления яиц в почве статистически достоверно отличается при оценке по критерию Стьюдента (уровне значимости 0,95) [3].
Разработанный нами метод позволил дополнительно выявить большее количество яиц аскарид, по сравнению с методом Романенко Н.А., что обусловлено использованием многокомпонентной флотационной смеси. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушали морфологию яиц паразитов и не создавали затруднений с морфологической идентификацией возбудителя. Каждый из них выполнял определенную функцию: хлористый цинк повышал плотность раствора, глицерин снижал время кристаллизации, увеличивая качество исследования, хлорид натрия снижал себестоимость анализа. Как правило, применение такого рода смесей позволяет повысить выявление яиц, ооцист и цист простейших, но требует проведение оптимизации состава смеси к каждому конкретному случаю [4].
Кроме того предлагаемый нами способ позволяет вдвое сократить время проведения анализа. Это делает оправданным использование предлагаемого метода на практике и для проведения научных исследований.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно повысить эффективность выявления яиц в пробах почвы по сравнению с методом Романенко Н.А. и может использоваться на практике и при проведении научных исследований.
Литература: 1. МУК 4.2.796–99. «Методы санитарно-паразитологических исследований». 2. Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г.//Тр. ВИГИС.- М. – 2005. – Т. 41. – С. 2005. – С. 154 – 160. 3. Савилов Е.Д., Мамонова Л.М., Астафьев В.А., Жданова С.Н.// М.: «МЕДпресс-информ», 2004. – С. 21– 26. 4. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Корнишина М.Д. // Казань, 2002, – 24 с.
© 2016 The Author(s). Published by All-Russian Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants named after K.I. Skryabin.
This is an open access article under the Agreement of 02.07.2014 (Russian Science Citation Index (RSCI) and the Agreement of 12.06.2014 (CABI.org / Human Sciences section).